单抗与多抗的区别比较

2019.03.24-4   文章来源:德泰生物

描述:随着单抗与多抗的广泛应用,人们对两者的关注度也越来越高,单抗和多抗的区别、它们各自的优缺点也成 为人们关注的焦点。本文主要介绍了单克隆抗体与多克隆抗体的定义,单抗、多抗制备的大致流程以及它们各自的 特点和应用。

定义

抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇,也称为抗原表 位。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇,因此,机体也可以产生多种不同 的抗体。由单一 B 细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体, 称为单克隆抗体。而由多个 B 淋巴细胞克隆产生的,受到多种抗原决定簇刺激 并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体。从某种角度而言,多抗是 多种单抗的混合物。

区别

制备的区别

经过特定抗原处理过的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞,经 HAT 培养基筛选、 ELISA 检测效价后就得到阳性克隆株,最后进行细胞培养或将细胞注入到动物(一般为 balb/c 小鼠)腹腔中用腹 水培养,收集上清/腹水纯化后就能得到单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐,只需将抗原(纯 度越高越好)直接注入到动物体内进行免疫,经过 3~4 次免疫,ELISA 测其效价合格后,收集血液离心得到上清, 纯化后即能得到多克隆抗体。因此制备多抗的周期就比单抗的短,首次制备价格也比单抗要低。

应用的区别

单抗和多抗都有各自鲜明的特点与优势。单克隆抗体的特异性高,一旦制备成功就可以永续的生产完全一致的抗 体,因此可以对其特异性进行全面、系统地验证。但如果所识别的抗原表位被破坏,实验的结果将会受到很大的影响,这也是单抗的缺点之一。而多克隆抗体的特异性较差,即使是使用相同的抗原制备多抗,不同批次间也会存在 差异,因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时,更容易造成背景,例如在 WB 中 有杂带,在 IHC 中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应*的问题,但由于多抗识别多个抗原表位,即使是有少数 几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变,实验的结果也不会受到影响。在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵 敏度,对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。

如果对抗体的特异性要求高,用量较大或需要长期使用一致的抗体,制备的抗体应用要求多(WB/IP/IF/ICC 等), 可以选择制备单克隆抗体。若对抗体的特异性要求不高,需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做 ELISA 检测,可以选择制备多克隆抗体。

单抗、多抗比较表

  多抗 单抗
对免疫原的要求 免疫原纯度越高越好 不纯的免疫原也能得到高纯度的抗体
特异性 高(抗原亲和纯化)
稳定性 较好 相对较差,对理化条件敏感
标准化 较难,不同批次的抗体质量差异大 易于标准化,批次间差异小
识别 多表位 只有一个抗原表位
交叉反应 很常见,难避免非特异反应 不常见,可避免非特异反应
凝集反应 大多数没有
沉淀反应 大多数没有
成本
周期

*交叉反应:从理论上说,用小鼠抗原制备的抗体应只能用于小鼠,但是由于动物种属之间,特别是相近的动物之 间存在着同源性(如大鼠与小鼠),这样会导致抗体发生交叉反应,即用一种动物抗原制备的抗体也可与其它一些 物种的抗原反应。


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