方案一
标记比例：（抗体 :HRP标记质量比位 1：1；抗原 :HRP质量比为 1：4 左右）； 根据标记比例计算所需 HRP量 X。
一、蛋白透析
1、 目标蛋白透析到 CB(pH9.6，50mM) 中，换液 2 次以上。
二、酶的氧化
2、 称取 Xmg HRP干粉 (Biozyme or Sigma)溶于 X/20 mL ddH2O 中。
3、 称取 NaIO4 y mg( y>X)，溶于y/20 mL的ddH2O中，吸取 X/20 mLNaIO4 溶液与X/20 mL的HRP溶液缓慢混合， 4℃下静置 30min 。（此时溶液为绿色）注意：此后的操作均在避光条件下进行。
4、 吸取 X μL乙二醇（体积太小，难以控制，所以请应事先用水稀释至50μL进行）缓慢加入氧化后的 HRP溶液，室温避光静置 30min。（此时溶液为褐色）。
三、标记
5、 将氧化好的HRP直接加入到已透析充分的抗原/抗体蛋白
6、 继续透析到 CB(pH9.6，50mM) 中，换液 2 次以上；
7、 加入 X/5mg NaBH4到其中（需新鲜配置，先溶于10X μL的ddH2O 中），4℃静置 2hr（不能再透析），每 30min 摇动 1 次。
8、 PBS(10mM，pH7.2)透析过夜， 标记液中加入体积比 50%的甘油，混匀后置于 -20℃保存。
方案二
HRP标记抗体的方法 ( 戊二醛二步法和简易过碘酸钠法 )
一、戊二醛二步法戊二醛为一种双功 能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶- 戊二醛 - 免疫球蛋白结合物。
二、简易过碘酸钠法
本法是以 NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，将近70%的HRP和Ig结合，99%的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重大损失，是目前最常用的方法。
1. 原理
戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶 戊二醛 - 免疫球蛋白结合物。
2. 标记步骤
（1）称取 HRP25mg溶于 1.25%戊二醛溶液中，于室温静置过夜。
（2）反应后的酶溶液经Sephadex G-25 层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在 1ml/1 分钟， 收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置 25ml小烧杯中，缓慢搅拌。
（3）将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。
（4）用 1M PH9.5 碳酸缓冲液 0.25ml ，继续搅拌3小时。
（5）加 0.2M 赖氨酸 0.25ml ，混匀后，置室温 2 小时。
（6）在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置 4℃ 1 小时。
（7）3000rpm 离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次， 最后沉淀物溶于少量 0.15M PH7.4 的 PBS中。